300kd खोखले फाइबर अल्ट्राफिल्ट्रेशन: पैरों के लिए उच्च दक्षता एकाग्रता और शुद्धिकरण प्रक्रिया का विश्लेषण और मुंह रोग ओ/ए वायरस के लिए शुद्धिकरण प्रक्रिया

परिचय

फुट{0}और-मुंह रोग (एफएमडी) एक तीव्र, ज्वरग्रस्त और अत्यधिक संक्रामक पशु रोग है, जो फुट{2}और-मुंह रोग वायरस (एफएमडीवी) के कारण होता है। यह वायरस 70 से अधिक अतिसंवेदनशील प्रजातियों सहित कटे-फुर वाले जानवरों को प्रभावित करता है। यह तेजी से फैलता है और इसकी रुग्णता दर उच्च होती है, जो आमतौर पर सूअर, भेड़ और मवेशियों जैसे प्रमुख पशुधन को प्रभावित करती है, जहां घटना 100% तक पहुंच सकती है। एफएमडीवी जीनस से संबंधित हैपैर{{0}और-मुँह का वायरसमाइक्रोआरएनएविरिडे परिवार का। कण गोलाकार होते हैं, व्यास में लगभग 27-30 एनएम, अक्षुण्ण वायरल कणों के लिए अवसादन गुणांक 146S होता है। वर्तमान में, विभिन्न एफएमडी टीके उपलब्ध हैं, जिनमें क्षीण जीवित वायरस टीके, जीवित वायरस वेक्टर टीके, निष्क्रिय टीके, न्यूक्लिक एसिड टीके, सिंथेटिक पेप्टाइड टीके और सबयूनिट टीके शामिल हैं। निष्क्रिय एफएमडी टीकों का आमतौर पर जानवरों में कम दुष्प्रभाव होता है, और बहुसंयोजी टीके बेहतर टीकाकरण प्रभावकारिता प्रदान करते हैं, जिससे वे चीन में एफएमडी की रोकथाम का मुख्य आधार बन जाते हैं।

स्पर्शरेखा प्रवाह अल्ट्राफिल्ट्रेशन

वर्तमान में, स्पर्शरेखीय प्रवाह अल्ट्राफिल्ट्रेशन फुट{1}और{{2}मुंह रोग मल्टीवैलेंट निष्क्रिय टीकों के बड़े पैमाने पर उत्पादन में आमतौर पर उपयोग की जाने वाली शुद्धिकरण और एकाग्रता विधि है। यह विधि न केवल वांछित एकाग्रता कारक प्राप्त करती है बल्कि बड़ी मात्रा में विदेशी अशुद्धियों को भी दूर करती है। स्पर्शरेखीय प्रवाह अल्ट्राफिल्ट्रेशन का उपयोग मुख्य रूप से शुद्धिकरण, एकाग्रता और निस्पंदन (डिसेल्टिंग और बफर प्रतिस्थापन) के लिए किया जाता है। इसके अलावा, इसका उपयोग स्पर्शरेखीय प्रवाह माइक्रोफिल्ट्रेशन का उपयोग करके किण्वन शोरबा या सेल संस्कृति माध्यम के स्पष्टीकरण के लिए भी किया जा सकता है, इस प्रकार सेंट्रीफ्यूजेशन या प्राथमिक स्पष्टीकरण की जगह ले सकता है।

पारंपरिक ऊर्ध्वाधर निस्पंदन में, बड़े अणु झिल्ली की सतह पर एकत्रित हो जाते हैं, जिससे फिल्टर अवरुद्ध हो जाता है। हालाँकि, स्पर्शरेखीय प्रवाह निस्पंदन, प्रवाह को झिल्ली के समानांतर आगे बढ़ने की अनुमति देता है, जिससे इस रुकावट की समस्या से बचा जा सकता है। स्पर्शरेखीय प्रवाह निस्पंदन के दौरान, विलायक और झिल्ली छिद्र के आकार से छोटे पदार्थ जो झिल्ली के माध्यम से प्रवेश करते हैं, उन्हें पर्मेट कहा जाता है, जबकि छिद्र के आकार से बड़े पदार्थों को सांद्रण के रूप में बनाए रखा जाता है। अनुकूलित धुलाई और निस्पंदन प्रक्रियाओं के साथ मिलकर, विभिन्न आकारों के अणुओं का पृथक्करण और शुद्धिकरण प्राप्त किया जा सकता है। यह तकनीक कम लागत, हल्के परिचालन की स्थिति, सुविधाजनक सफाई और प्रतिस्थापन, उच्च झिल्ली पारगम्य प्रवाह दर और सरल संचालन जैसे फायदे प्रदान करती है, जो इसे बड़े पैमाने पर एकाग्रता और बायोएक्टिव पदार्थों के शुद्धिकरण के लिए विशेष रूप से उपयुक्त बनाती है।

सामग्री और तरीके

परिणाम और चर्चा

प्रारंभिक वायरस शुद्धिकरण के संदर्भ में, अल्ट्राफिल्ट्रेशन एकाग्रता प्रोटीन जैसी अशुद्धियों के लिए 90% से अधिक की निष्कासन दर प्राप्त करती है जिसमें वायरस नहीं होते हैं। मात्रा के संदर्भ में, यह 10-50 गुना की उच्च सांद्रता प्राप्त कर सकता है, जो बाद के शुद्धिकरण के लिए मजबूत समर्थन प्रदान करता है। 300kd के आणविक भार कटऑफ के साथ एक खोखला फाइबर स्तंभ चुना गया है। यह छिद्र आकार, 85% से अधिक वायरस को बनाए रखते हुए, 90% से अधिक अशुद्ध प्रोटीन को हटा सकता है। झिल्ली क्षेत्र 1600 सेमी² है, और थ्रूपुट 2-5 एमएल/सेमी² है, जिससे अल्ट्राफिल्ट्रेशन एकाग्रता को प्रभावी समय (2 घंटे के भीतर) के भीतर पूरा किया जा सकता है। विस्तृत अल्ट्राफिल्ट्रेशन एकाग्रता और शुद्धिकरण डेटा तालिका 1 में दिखाया गया है।

तालिका 1. पैर {{1}और {{2}मुंह रोग प्रतिजनों (प्रकार ओ और ए) की कुल पहचान के परिणाम

शुद्धिकरण विधि पर विचार

वर्तमान में, विभिन्न शुद्धिकरण विधियां हैं, लेकिन एक ही एंटीजन के लिए एक ही विधि के साथ भी, एंटीजन लक्षण वर्णन और प्रक्रिया मापदंडों सहित कई कारणों से शुद्धिकरण प्रभाव अक्सर असंतोषजनक होता है। उदाहरण के लिए, अपस्ट्रीम आणविक डिजाइन या किण्वन संस्कृति प्रणालियों में परिवर्तन वायरल आणविक संरचना को बदल सकते हैं, जिससे असंतोषजनक शुद्धिकरण परिणाम हो सकते हैं। अनुचित स्पष्टीकरण विधियों से कच्चे माल की लागत या विषम प्रोटीन की मात्रा बढ़ सकती है, जिससे डाउनस्ट्रीम शुद्धिकरण पर दबाव बढ़ सकता है। अनुचित अल्ट्राफिल्ट्रेशन सांद्रता, जैसे कि विभिन्न अल्ट्राफिल्ट्रेशन झिल्ली छिद्र आकार, सांद्रता और निक्षालन कारक, इनलेट प्रवाह दर, निस्पंदन दर और टीएमपी, के परिणामस्वरूप कम एंटीजन रिकवरी दर हो सकती है। व्यापक अभ्यास से पता चलता है कि खराब शुद्धिकरण टीकाकरण के बाद जानवरों में महत्वपूर्ण प्रतिकूल प्रतिक्रिया पैदा कर सकता है, जिससे संभावित रूप से मृत्यु हो सकती है।